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小心!蛋白提取也是需要注意的

河南福彩幸运武林玩法 www.arhdnu.tw 發布日期:2019/5/15 10:47:26 閱讀次數:171次

做科研的,難免不了的連夜做實驗,寫論文......其實這些對實驗者來說根本算不了什么?或者來說他們也許早就適應了這樣的日常。只是好多小細節不注意,可能讓他們一夜回到解放前。不僅浪費了精力去做這個實驗,而且也花了代價去購買這些試劑,所以說,好多細節是需要我們注意的。    

那么下面問題就來了:
1.如何提取細胞蛋白樣品?
2.離心后上清出現白色粘稠的東西,很容易被吸上來,如何避免產生這種白色的東西?
3.吸到這種白色的東西,對WB結果有什么影響?

經過長期努力,我們找到以下答案:
1. 如何提取細胞蛋白樣品?
冰上裂解30min,期間渦旋振蕩一兩次以充分裂解(冰盒 或者任何裝有冰的容器,在搖床上震蕩)
2.離心后上清出現白色粘稠的東西,很容易被吸上來,如何避免產生這種白色的東西?
白色的應該是分離開的核酸,這個是無法避免的,本來就是想把蛋白和核酸區分開??梢猿⑹允褂貿撲榧復?/span>
3.吸到這種白色的東西,對WB結果有什么影響?
影響蛋白定量。如果目的蛋白是核蛋白,結果可能不好

但是我們也有相關事項需注意注意:
白色粘稠物質是細胞裂解不充分造成的,粘稠是染色質打開造成的,這是RIPA裂解提取蛋白通常都會遇到的,離心上清和沉淀會出現難分離的情況,現在有一種柱式法蛋白提取方法,可以很好的解決裂解之后粘稠的問題,不會出現不容組分,提取樣品總蛋白核酸物質掛在柱子上,蛋白溶液在收集管中。裂解細胞,過柱子,收集管里就是所需要的蛋白。組織樣品也一樣簡單操作5分鐘即可獲得總蛋白。無需擔心樣品粘稠,無需焦慮分離上清時沉淀的干擾。
 

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